KO first小鼠動物模型

簡要描述：KO first小鼠動物模型是一種多用途的條件基因敲除模型。該模型構建時，會利用基因編輯技術在目的基因的兩側插入方向相同的 LoxP 位點，并在靶片段 5' 端內(nèi)含子中放置一個兩側帶有 FRT 位點的 SA-IRES-reporter 片段，同時在目的基因敲除的外顯子兩側各插入一個 LoxP 位點。

更新時間：2025-06-26
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一、核心定義與技術原理

KO first（又稱Conditional Ready）是一種多用途基因敲除模型，通過雙重組系統(tǒng)（Cre/loxP + Flp/FRT）實現(xiàn)基因功能的靈活調(diào)控。其核心目標是為同一基因提供兩種研究路徑：

全身性敲除（KO）：yong久性失活靶基因，同時啟動報告基因表達。
條件性敲除（cKO）轉(zhuǎn)換：通過重組獲得Flox小鼠，用于組織特異性基因敲除。

分子結構設計

組件	功能	位置
同向loxP位點	被Cre重組酶識別，介導片段切除	靶基因關鍵外顯子兩側
FRT-flanked 盒	含SA-IRES-reporter（報告基因）和Neo（抗性基因）	靶基因5'端內(nèi)含子

二、構建流程與遺傳操作

步驟1：初始模型制備

通過CRISPR/Cas9技術將上述結構插入小鼠基因組，獲得floxed報告基因小鼠（即KO first基礎品系）。

步驟2：雙路徑分化

關鍵操作說明：

Cre介導重組：切除Neo基因及floxed區(qū)域，使報告基因受內(nèi)源啟動子調(diào)控（用于基因表達定位）。
Flp介導重組：移除SA-IRES-reporter盒，保留兩側loxP位點，生成傳統(tǒng)Flox小鼠。

案例：胚胎凍存品系構建

Fbn1-KO：敲除exon 65-66的凍存品系，需避免胚胎致死。
Prps1-KO：敲除exon 2的C57BL/6Smoc品系。

三、核心應用場景

1. 基因功能全景研究

應用方向	實現(xiàn)方式	案例
全身性功能缺失	直接使用KO first品系	Oprm1-KO研究多巴胺系統(tǒng)
時空特異性敲除	轉(zhuǎn)換為Flox后交配組織特異性Cre	神經(jīng)元Tau敲除（阿爾茨海默?。?/td>
基因表達動態(tài)追蹤	報告基因可視化（如GFP/LacZ）	通過SA-IRES-reporter定位靶基因表達域

2. 疾病機制與治療評估

免疫介導疾病：

α-Gal KO小鼠評估xin臟瓣膜鈣化，抗Gal抗體滴度提升2倍，鈣沉積量增加4倍。

神經(jīng)系統(tǒng)疾病：

Cnr1-KO用于抑郁癥及癲癇研究。

3. 藥物靶點驗證

多基因協(xié)同調(diào)控：通過Flp/Cre系統(tǒng)構建多基因cKO，模擬復雜疾?。ㄈ缒[瘤微環(huán)境）

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二、構建流程與遺傳操作

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三、核心應用場景

1. 基因功能全景研究

2. 疾病機制與治療評估

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