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          甲基化檢測(cè)MSP

          簡(jiǎn)要描述:甲基化檢測(cè)MSP:DNA經(jīng)亞硫酸氫鈉處理后,所有未甲基化的胞腔啶發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏?,而甲基化的胞嘧啶則不變,基于這種堿基的改變,然后設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物并進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增,然后通過瓊脂糖凝膠電泳分析,確定與引物互補(bǔ)的DNA序列的甲基化狀態(tài)。

          • 更新時(shí)間:2022-12-23
          • 瀏覽次數(shù):2308

          詳細(xì)介紹

          甲基化檢測(cè)原理:

          甲基化特異性的PCR是種靈敏度高且操作相對(duì)簡(jiǎn)單的甲基化研究方法。重亞硫酸鹽處理DNA后,基因組DNA發(fā)生的由甲基化狀態(tài)決定的序列改變。隨后進(jìn)行引物特異性的PCR。該方法引物設(shè)計(jì)是關(guān)鍵。MSP中設(shè)計(jì)兩對(duì)引物,即一對(duì)結(jié)合處理后的甲基化DNA鏈(引物對(duì)M),另一對(duì)結(jié)合處理后的非甲基化DNA鏈(引物對(duì)U)。檢測(cè)MSP增產(chǎn)物,如果用引物M能擴(kuò)增出片段,則說明檢測(cè)位點(diǎn)存在甲基化;若用引物U擴(kuò)增出片段,則說明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化。

          MSP:原理是基于DNA經(jīng)亞硫酸氫鈉處理后,所有未甲基化的胞腔啶發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏?,而甲基化的胞嘧啶則不變。基于這種堿基的改變,然后設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物并進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增,然后通過瓊脂糖凝膠電泳分析,確定與引物互補(bǔ)的DNA序列的甲基化狀態(tài)。

          甲基化檢測(cè)優(yōu)點(diǎn):檢測(cè)靈敏度高,樣品消耗少,僅需1μg的基因組DNA,可用于石蠟包埋樣本;快速、簡(jiǎn)單,省時(shí)。

          服務(wù)流程:
          1.根據(jù)目的基因啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)相應(yīng)的引物;

          2.基因組DNA的提取和定量;

          3.亞疏酸氫鈉修飾基因組DNA;

          4.修飾后DNA純化回收;

          5.a.結(jié)合實(shí)時(shí)定量PCR的qMSP;
            b.BSP,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序并與未經(jīng)處理的序列比較;

          6.數(shù)據(jù)處理:向客戶提供數(shù)據(jù)分析結(jié)果與實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

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